Resumen

Introducción El objetivo de la ingeniería de tejidos es desarrollar biomateriales que actúen como matriz extracelular (MEC) para proporcionar soporte estructural y funcional en la reparación de tejidos, especialmente en el tratamiento de lesiones ginecológicas, congénitas o adhesiones intrauterinas. Para lograr esto, se utiliza la descelularización tisular, un proceso que elimina las células para evitar respuestas inmunes adversas y que conserva la arquitectura de la MEC. Aunque los protocolos actuales de descelularización a menudo emplean reactivos costosos o enzimas que pueden ser tóxicos, también se han desarrollado métodos basados en detergentes y buffers que han mostrado resultados prometedores. Sin embargo, la consistencia y la reproducibilidad de estos métodos siguen siendo desafíos significativos en el campo de la ingeniería de tejidos.

Objetivos El objetivo de este estudio descriptivo fue replicar, validar y optimizar un protocolo de baja toxicidad y costo de descelularización de oviductos de rata, para reparar lesiones del aparato reproductor femenino.

Metodología El protocolo consistió en la extracción y microdisección de oviductos de rata, los cuales fueron sometidos a 3 ciclos de congelación/descongelación a -80/37°C respectivamente. Luego, según protocolo modificado de Sargazi, Zavareh se incubaron en detergentes Tritón X-100 al 1% durante 15h y SDS al 1% durante 72-120h a 25°C y 90 RPM de agitación orbital. Finalmente, se incubaron en buffer Tris-EDTA para eliminar el ADN remanente. Los tejidos descelularizados fueron fijados según protocolo Elabscience en PFA 4% y evaluados por tinción hematoxilina-eosina, azúl de alcian, picrosirius. Además, se realizó extracción de ADN según protocolo del fabricante Thermo Fisher Scientific (2023) y cuantificación por espectrofotometría para evaluar el remanente de ADN.

Resultados principales Los tejidos descelularizados en este protocolo presentaron una organización similar a la reportada por otros métodos, conservando la estructura del oviducto. El análisis mediante técnicas histoquímicas muestra presencia y organización conservada de moléculas de la MEC, incluyendo carbohidratos ácidos y colágeno. El biomaterial obtenido no presentó núcleos visibles al marcaje fluorescente.

Conclusiones En conclusión, el protocolo desarrollado permite obtener matrices extracelulares descelularizadas sin necesidad de reactivos altamente tóxicos o costosos, manteniendo propiedades morfológicas, de composición y organización comparables a otros métodos previamente reportados. Estos biomateriales podrían ser potencialmente útiles para el tratamiento de lesiones en el aparato reproductor femenino.